SU-100 je u službi bio tijekom posljednje godine Drugog svjetskog rata. U velikom se broju koristio u Mađarskoj u ožujku 1945. godine, kada su sovjetske snage porazile Nijemce u Balatonskoj ofenzivi. U srpnju 1945. je izgrađeno 2335 primjeraka SU-100.
SU-100 su koristili Sovjetski Savez, Egipat, Angola i Kuba. Arapska je zemlja razarače tenkova koristila u Sinajskom ratu (1956.), gdje su terorizirali posade tenkova M4 Sherman američke proizvodnje, koje je koristio Izrael. Ponovno su se na strani zemlje faraona borili u ratovima 1967. i 1973. godine.
Lovci tenkova SU-100 su u SSSR-u iz službe povučeni 1957. godine, kada su prebačeni u rezervu, gdje mnogi ostaju do danas. Velik broj ovih razarača je, na sreću ljubitelja oklopnih vozila, u savršenom operativnom stanju.
Vijetnam, Sjeverna Koreja i Jemen ih još nisu umirovili.